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產(chǎn)品名稱:Gibco CTS?TrypLE?Select酶 A1285901
產(chǎn)品貨號:A1285901
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
產(chǎn)品品牌:Gibco
供應(yīng)商:Gibco
產(chǎn)品產(chǎn)地: 美國產(chǎn)品價格:￥1013
產(chǎn)品說明書:

　　　　　北京　北京

保存于運輸說明：
室溫保存

詳細信息：

Gibco CTS™TrypLE™Select酶 A1285901

名稱	品牌	貨號	規(guī)格	保存
CTS™ TrypLE™ Select 酶	Gibco	A1285901	100ml/瓶	室溫保存

產(chǎn)品介紹

TrypLE™ Select CTS™ 是由微生物發(fā)酵獲得的一種重組酶，可用作豬胰蛋白酶的非動物來源替代品。在從研究應(yīng)用向臨床應(yīng)用過渡的過程中，GIBCO™ CTS™ 產(chǎn)品系列能夠減少試劑驗證方面的負擔。

• 在從研究向臨床應(yīng)用的過渡過程中，GIBCO™ TrypLE™ Select ™ CTS™ 能夠減少試劑驗證方面的負擔。

• 非動物或人源性

• 降低病毒或朊病毒污染的風(fēng)險

• 清除動力學(xué)及恢復(fù)活力可與豬胰蛋白酶媲美

• 對多種細胞系具有活性，包括強附著細胞系

• 室溫下（15 至 30°C）可保持穩(wěn)定長達 24 個月。

• 使用專用的高壓滅菌或一次性設(shè)備生產(chǎn)。

TrypLE™ Select CTS™ 是由微生物發(fā)酵獲得的一種重組酶，可用作豬胰蛋白酶的非動物來源替代品。該材料用于從塑料器具中解離附著依賴性細胞系。無論在不含血清還是添加血清的培養(yǎng)系統(tǒng)中，TrypLE Select 都能夠解離培養(yǎng)的細胞。該產(chǎn)品以 1X 儲備液形式提供，使用 DPBS 配制而成，包含 1 mM EDTA。這種 rProtease 的濃度是Invitrogen Corp. 的專有技術(shù)。

GIBCO™ CTS™ 產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)異，并附有相應(yīng)的證明文件，如質(zhì)檢證明、原產(chǎn)地證明，可獲取藥品主文件授權(quán)許可證。在從科研向臨床應(yīng)用過渡時，GIBCO™ CTS™ 全線產(chǎn)品能夠減少試劑驗證方面的負擔。

適用于研究用途或細胞、基因或組織相關(guān)產(chǎn)品的生產(chǎn)。注意：不適用于向人或動物進行直接給藥

使用步驟

1.準備工作:

預(yù)熱：將 CTS™ TrypLE™ Select 酶和必要的緩沖液（如 DPBS, D-PBS without Ca²?/Mg²?）或培養(yǎng)基置于 37°C 水浴或培養(yǎng)箱中預(yù)熱約 15-30 分鐘。避免反復(fù)凍融，解凍后建議分裝并儲存于 -5°C 至 -20°C。使用前確保酶液澄清，無沉淀或渾濁。

平衡：將需要解離的細胞培養(yǎng)容器（如培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、多層培養(yǎng)器）從培養(yǎng)箱中取出，靜置片刻使其溫度接近室溫或 37°C（操作時動作要快，避免細胞長時間處于非最適溫度）。

試劑準備：準備好預(yù)熱好的含血清的完全培養(yǎng)基（或其他含有蛋白酶抑制劑的合適溶液，如 CTS™ TrypLE™ Select 終止液）用于中和酶活性，以及無菌的移液管、離心管等。

2.移除培養(yǎng)液:

無菌操作下，小心吸棄或抽吸掉細胞培養(yǎng)容器中的舊培養(yǎng)基。這一步去除血清（含蛋白酶抑制劑）對后續(xù)酶解離的干擾。

3洗滌細胞 (可選但推薦):

向容器中加入少量（足以覆蓋細胞層即可，例如 T-75 瓶加 5-10ml）預(yù)熱的 DPBS (不含 Ca²?/Mg²?) 或其他合適的平衡鹽溶液（如 HBSS）。

輕輕搖晃容器洗滌細胞表面，去除殘留的培養(yǎng)基和血清。

完全吸棄洗滌液。此步驟有助于提高 TrypLE™ Select 的效率，尤其是在血清殘留較多時。

4.加入 CTS™ TrypLE™ Select 酶:

向容器中加入預(yù)熱的 CTS™ TrypLE™ Select 酶液。用量是關(guān)鍵！

一般起始用量：以能薄薄覆蓋整個細胞層為準（例如 T-25 瓶約 1ml, T-75 瓶約 2-3ml）。請參考產(chǎn)品說明書或針對您特定細胞類型和容器優(yōu)化的 SOP。

優(yōu)化： ******用量和孵育時間高度依賴細胞類型、匯合度、培養(yǎng)容器和培養(yǎng)表面。需通過預(yù)實驗確定最短有效時間，避免過度消化損傷細胞。通常比傳統(tǒng)胰蛋白酶所需時間略長（幾分鐘到十幾分鐘）。

確保酶液均勻覆蓋細胞層?？奢p輕搖晃容器使其分布均勻。

5孵育:

將容器放回 37°C 培養(yǎng)箱中孵育。

監(jiān)控：密切觀察細胞形態(tài)變化。通常在 2-5 分鐘后（具體時間需優(yōu)化），在顯微鏡下檢查。當大部分細胞變圓、邊緣折光性增強、細胞間隙增大時（通常約 70-90% 細胞從底部脫離），即為解離完成的合適時機。避免孵育過久導(dǎo)致細胞損傷或死亡。

6.解離細胞:

從培養(yǎng)箱取出容器。

物理輔助：用手掌用力拍打培養(yǎng)瓶側(cè)壁幾次，或使用無菌移液管輕柔吹打培養(yǎng)表面（沿細胞生長面移動吹打），幫助已松動的細胞完全脫落，形成單細胞懸液。

吹打技巧：動作要輕柔但有效，避免產(chǎn)生過多氣泡或剪切力損傷細胞。吹打次數(shù)根據(jù)細胞類型調(diào)整。

7.終止反應(yīng):

立即向含有細胞懸液的酶溶液中加入等體積或更多（通常 2-4 倍體積）的預(yù)熱的含血清完全培養(yǎng)基（或預(yù)熱的 CTS™ TrypLE™ Select 終止液）。血清中的蛋白酶抑制劑能迅速中和 TrypLE™ Select 的活性。這一步至關(guān)重要，必須及時進行！輕輕混勻。

8.收集細胞:

將容器內(nèi)的細胞懸液（酶+中和液）轉(zhuǎn)移至一個無菌的離心管中。

9.離心洗滌 (可選但常用):

根據(jù)后續(xù)實驗需求（如傳代、凍存、下游應(yīng)用），通常需要洗滌去除殘留的酶和中和液：

在離心管中，用不含 Ca²?/Mg²? 的 DPBS 或適當?shù)木彌_液將懸液體積補足。

在室溫或 4°C 下進行離心（離心力需優(yōu)化，常用范圍 200-400 x g, 離心 3-5 分鐘）。具體參數(shù)需根據(jù)細胞類型確定，避免過大離心力損傷細胞。小心吸棄上清液，避免擾動細胞沉淀。

10.重懸細胞:

根據(jù)后續(xù)用途（如接種、計數(shù)、凍存），用適量的預(yù)熱的完全培養(yǎng)基或合適的緩沖液（如生理鹽水、凍存液）輕柔地重懸細胞沉淀，吹打成單細胞懸液。

進行細胞計數(shù)，確定細胞濃度和活力。

產(chǎn)品規(guī)格

細胞類型	哺乳動物細胞
濃度	1 X
適用于（應(yīng)用）	臨床研究、轉(zhuǎn)化研究
產(chǎn)品規(guī)格	瓶
環(huán)保功能	節(jié)能、可持續(xù)包裝
生產(chǎn)質(zhì)量	ISO 13485, MDSAP, FDA-registered, 21 CFR 820
數(shù)量	100ml
有效期	24 個月
運輸條件	室溫
分類	無動物來源
形式	液體
產(chǎn)品類型	細胞培養(yǎng)解離試劑
無菌	無菌過濾
不加添加劑	無酚紅
Unit Size	Each

培養(yǎng)基配方

TrypLE™ Select CTS™A1285901
成分	分子量	濃度（mg/L）	毫米
無機Sa
氯化鉀（KCI）	75.0	200.0	2.6666667
磷酸二氫鉀	136.0	200.0	1.4705882
氯化鈉（NaCI）	58.0	8000.0	137.93103
磷酸氫二鈉	268.0	2160.0	8.059702
其他組件
乙二胺四乙酸	416.0	457.6	1.0
蛋白酶		機密的	n/a

內(nèi)容與儲存

在室溫下儲存。

引用和文獻

An effective freezing/thawing method for human pluripotent stem cells cultured in chemically-defined and feeder-free conditions.

Authors:Nishishita N, Muramatsu M, Kawamata S

Journal:

PubMed ID:25973330